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Aktivierungs-Tagging mit Hilfe eines induzierbaren Zweikomponenten Ac/Ds-Enhancer-Element Systems

Projekt

Produktionsverfahren

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Produktionsverfahren


Förderkennzeichen: DFG 13020377
Laufzeit: 01.06.2005 - 31.05.2011
Forschungszweck: Grundlagenforschung

In diesem Antrag ist geplant, die Transponierbarkeit des ATDs Elements mittels PCR und Southern-Blot-Analysen zu bestätigen. Die ATDs Integrationsorte sollen charakterisiert und flankierende genomische Regionen sequenziert werden. Für die Aktivierung-Tagging Experimente sollen von mindestens zehn verschiedenen Doppel-transgenen Linien mehr als 2.000 kleine regenerierende Kallusstücke verwendet werden. Schließlich sollen neuartige Integrationsorte des ATDs Elements molekular charakterisiert werden. Im ersten Projekt (FL263/12-2) wurde ein induzierbares zwei Element Ac/ATDs-System vorgeschlagen, um eine Aktivierung-markierendes System in der hybriden Zitterpappel (Populus tremula x tremuloides) zu etablieren. Der vorgeschlagene Ansatz beruhte auf Ergebnissen unserer früheren Arbeiten zur genetischen Übertragung des Maises transposablen Elements Ac und der Funktionsanalyse in hybriden und reinen Zitterpappel-Linien. Alle im ersten Projektantrag beschriebenen Konstrukte (mit dem Transposase-Gen unter zwei induzierbaren Promotoren [GIP oder Hitzeschock], und das Aktivierungskonstrukt (ATDs) entweder mit rolC oder mit tms) wurden erstellt. Transgene Pappelplanzen wurden erhalten, die entweder ein oder zwei der Konstrukte tragen. Nach Induktion des GIP-Promotors konnte ein Transposase-Signal in RT-PCR-Experimenten gefunden werden. Ein starkes Transposase-Signal konnte in RT-PCR-Experimenten nach Induktion des Hitzeschock-Promotors detektiert werden. Ein erstes Aktivierung-Tagging Experiment wurde mit acht verschiedenen Doppel-transgenen Linien begonnen. Schlagworte: Aspe

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Fachgebiete

Ausführende Einrichtung

Institut für Forstgenetik (TI-FG)

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