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Vorbereitung auf die laborexterne Prävalidierung: Optimierung der laborintern validierten und standardisierten Methode zur Quantifizierung der Angiogenese und Antiangiogenese in vitro durch die Bestimmung des angiogenen Standards der zu verwendenden Zellkultur
Projekt
Förderkennzeichen: BfR-ZEBET-08-1328-206
Laufzeit: 01.08.2007
- 31.07.2010
Forschungszweck: Angewandte Forschung
Ziel des Projekts ist die Optimierung einer bereits intern validierten und standardisierten Methode zur Quantifizierung der Angiogenese und Antiangiogenese in vitro. Diese Methode basiert auf der in vitro-Kultivierung von mikrovaskulären Endothelzellen. Stimuliert durch Wachstumsmedien, zeigten die Zellen charakteristische morphologische Veränderungen, welche den Phasen der angiogenen Kaskade in vivo zugeordnet werden konnten und in eindeutig definierte Stadien eingeteilt wurden. Die Quantifizierung der Angiogenese bzw. Antiangiogenese erfolgt durch die zeitliche Erfassung dieser Stadien. Im Focus dieses Projekts stehen die in dem Modell zu verwendenden Endothelzellen. Mit Hilfe der zweidimensionalen Gelelektrophorese soll das Proteinexpressionsprofil von vier humanen Endothelzellkulturen, von denen nur zwei das Potential besitzen, bei Stimulation alle Stadien der Angiogenese in vitro chronologisch zu durchlaufen, bestimmt werden. Durch den Vergleich dieser Proteinexpressionsprofile sollen die Proteine ermittelt werden, die nur in den beiden Kulturen mit der ?angiogenen Potenz? gleichermaßen exprimiert werden. Die anschließende selektive Unterdrückung der Expression dieser Proteine mittels Gene Silencing führt dann zur der Kenntnis, welche dieser Proteine für die ?angiogene Potenz? verantwortlich sind. Diese können dann in Zukunft als Marker für die ?angiogene Potenz? verwendet werden, um die Verwendbarkeit einer Endothelzellkultur für die Untersuchung und Quantifizierung der Angiogenese und Antiangiogenese in vitro zu prüfen. Damit sind dann die Voraussetzungen dafür geschaffen, dass im nächsten Schritt die Prävalidierung der Methode zur Quantifizierung der Angiogenese und Antiangiogenese in vitro in externen Labors erfolgen kann.
Abschnittsübersicht
Fachgebiete
- Tiergesundheit
- Biotechnologie
